En esta ocasión, la acción se desarrollará en la Italia del Renacimiento (en 1476), pudiendo visitar ciudades como Venecia o Sicilia encarnando al noble procedente de Florencia llamado Ezio, que sustituye a Altair como protagonista del juego. éste, podrá hacer uso de diferentes artilugios mortíferos que en la mayoría de casos han surgido de diseños de DaVinci (tendremos incluso la posibilidad de planear entre edificios).
Nuestro héroe contará también con nuevas armas como hachas, martillos de guerra, mazas, diferentes tipos de espadas, etc. También, Ezio podrá nadar y, como no, se relacionará con diversos personajes (habrá referencias a sucesosdel título original) como Lorenzo de Medici o Maquiavelo. El juego también presentará nuevos movimientos de ataque y defensa como lap osibilidad de desarmar a los enemigos y usar sus propias armas en su contra al mismo tiempo.
Habrá 16 tipos de misiones distintas para aumentar la variedad de situaciones del título original, y por supuesto, objetos ocultos que deberemos buscar por cada escenario. Por último, se mantienen detalles como la posibilidad de montar a caballo y escalar a las torres más altas de las ciudades que recorreremos, amén de vivir el asesinato de Lorenzo de Medici en el juego, y disfrutar de misiones tanto de día como de noche.
